Protocolo para detecção do polimorfismo no gene β (Ava II) no cluster β globina (Haplótipo)
Protocolo de Amplificação
Seqüências de Primers:
P1 5´ AAG TGT GGA GTG TGC ACA TGA 3´
P5 5´ TGC TGC TAA TGC TTC ATT ACA A3´
- Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
- Tamanho do fragmento = 763 pb
Protocolo de Digestão
Ava II – Biolabs®
Tampão Ava II (1 X) 1,5 µL
Ava II 0,2 µL
H2O 3,3 µL
Produto de PCR 10,0 µL
- Colocar em banho-maria a 37° C por 3 horas.
- A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 1,5%, 80 volts 30 minutos.
A presença do polimorfismo na região no gene β, reconhecido pela enzima Ava II (g↓gwcc), após a digestão, gera 2 alelos com fragmentos de 449, 214 e 103 pb e a ausência do polimorfismo gera 1 fragmento de 763 pb.
