Protocolo para detecção do polimorfismo na região 3´β (Bam HI) no cluster β globina (Haplótipo)

Protocolo de Amplificação

Seqüências de Primers:

SF1 5´ GCT CTA CGG ATG TGT GAG AT 3´
SF2 5´ GCC CAC ATC ACC AAG GCA AT 3´

  • Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
  • Tamanho do fragmento = 1520 pb

Protocolo de Digestão

Bam HI – Biolabs®
Tampão Bam HI (1 X)      1,5 µL
Bam HI                               0,2 µL
H2O                                     3,3 µL
Produto de PCR              10,0 µL

  • Colocar em banho-maria a 37° C por 3 horas.
  • A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 1,0%, 80 volts 30 minutos.

A presença do polimorfismo na região no gene β, reconhecido pela enzima Bam H (g↓gatcc) I, após a digestão, gera 2 alelos com fragmentos de 1228 e 292 pb e a ausência do polimorfismo gera 1 fragmento de 1520 pb.