Protocolo para detecção do Fator V de Leiden

Protocolo de Amplificação:

Sequências de Primers:

FV1 5´ CTT GAA GGA AAT GCC CCA TTA 3´
FV2 5´TGC CCA GTG CTT AAC AAG ACC A 3´

  • Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
  • Tamanho do fragmento = 220pb

Protocolo de Digestão


FastDigest-Mnl I – Fermentas
Tampão 1                                         X 1,0 µL
FastDigest Mnl I (1FDU/µL)          0,3 µL
H2O                                                     8,7 µL
Produto de PCR                              10,0 µL

  • Colocar em banho-maria a 37° C por 5 minutos (Fermentas)
  • A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 2,0%, 100 volts 40 minutos.

Enzima Mnl I (cctcn(7)↓); assim, após a digestão o alelo normal gera 3 fragmentos: 116, 67 e 27pb, e o alelo mutante gera 2 fragmentos: 116 e 67 pb.