Protocolo para detecção de hemoglobina C (HbC)

Protocolo de Amplificação

Sequências de Primers:

P277 5´GGC AGA GCC ATC TAT TGC TTA 3`
P278 5´ACC TTA GGG TTG CCC ATA AC 3´

  • Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
  • Tamanho do fragmento = 382 pb

Protocolo de Digestão

BseR I – Biolabs®
Tampão BseR I 10X            2,1 µL
BseR I (10.000U/mL)        1,0 µL
H2O                                     10,0 µL
Produto de PCR                 10,0 µL

  • Colocar em banho-maria a 37° C por 3 horas.
  • A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 1,5%, 80 volts 30 minutos.

Mutação no códon 6 (GAG > AAG) elimina um sítio de restrição da enzima BseR I (gaggag); assim após a digestão o alelo normal gera 2 fragmentos: 293 e 83 pb e o alelo mutante gera 1 fragmento de 382 pb.