Protocolo para detecção de hemoglobina Hasharon (Hb Hasharon)

Protocolo de Amplificação

Sequências de Primers:

LH1     5`AGG CCC TGG AGA GGT GAG 3`
RIGHT 5`GGA GCT GTG CAG AGA AGA GG 3`

  • Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
  • Tamanho do fragmento = 481 pb

Protocolo de Digestão

Taq I – Biolabs®
Tampão Taq I 1X            10,0 µL
Taq I (20U/mL)                1,5 µL
BSA                                   0,25 µL
Produto de PCR              10,0 µL

  • Colocar em banho-maria a 65° C por 3 horas.
  • A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 1,5%, 80 volts 30 minutos.

Mutação no códon 47 do gene da alfa globina 2 (GAC > CAC) elimina um sítio de restrição da Enzima Taq I (t↓cga); assim, após a digestão o alelo normal gera 3 fragmentos: 189, 175 e 117 , e o alelo mutante gera 2 fragmentos de 364 e 117 pb.