Protocolo para detecção do sítio 3’ψβ (Hinc II) no cluster β globina (Haplótipo)

Protocolo de Amplificação

Seqüências de Primers:

H7 5´ TCT GCA TTT GAC TCT GTT AGC 3´
H8 5´ GGA CCC TAA CTG ATA TAA CTA 3´

  • Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
  • Tamanho do fragmento = 590pb

Protocolo de Digestão

FastDigest Hinc II – Fermentas®
Tampão FastDigest Hinc II (10 X)           1,0 µL
FastDigest Hinc II (1 FDU/ uL)                0,5 µL
H2O                                                                8,5 µL
Produto de PCR                                            5,0 µL

  • Colocar em banho-maria a 37° C por 5 minutos
  • A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 1,5%, 80 volts 30 minutos.

A presença do polimorfismo na região 3’ψβ, reconhecido pela enzima Hinc II (gty↓rac), após a digestão, gera 2 alelos com fragmentos de 470 e 120 pb e a ausência do polimorfismo gera 1 fragmento de 590 pb.