Protocolo para detecção do sítio 5’ β (Hinf I) no cluster β globina (Haplótipo)
Protocolo de Amplificação
Seqüências de Primers:
H9 5´ CTA CGC TGA CCT CAT AAA TG 3´
H10 5´ CTA ATC TGC AAG AGT GTC T 3´
- Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
- Tamanho do fragmento = 380 pb
Protocolo de Digestão
FastDigest Hinf I – Fermentas®
Tampão FastDigest® 1,0 µL
FastDigest® Hinf I (1 FDU/µL) 0,3 µL
H2O 8,7 µL
Produto de PCR 10,0 µL
- Colocar em banho-maria a 37° C por 5 minutos.
- A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 1,5%, 80 volts 30 minutos.
A presença do polimorfismo na região 5’ β, reconhecido pela enzima Hinf I (g↓antc), após a digestão, gera 2 alelos com fragmentos de 240 e 140 pb e a ausência do polimorfismo gera 1 fragmento de 380 pb.
