Protocolo para detecção de Metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR)
Protocolo de Amplificação
Sequências de Primers:
MTHFR1 5´AGG ACGGTG CGG TGA GAG TG 3`
MTHFR2 5´ TGA AGG AGA AGG TGT CTG CGG 3´
- Análise da amplificação em gel de agarose 1,5 %, 80 Volts, 20 minutos
- Tamanho do fragmento = 198 pb
Protocolo de Amplificação
Hinf I – Fermentas
Tampão Hinf I 10X 1,0 µL
Hinf I (FastDigest) 0,3 µL
H2O 8,7 µL
Produto de PCR 10,0 µL
- Colocar em banho-maria a 37° C por 5 minutos (Hinf I).
- A análise da digestão deverá ser realizada em gel de agarose 2,0 %, 100volts, 40 minutos.
Enzima HinfI (g↓antc); assim após a digestão o alelo normal gera 1 fragmento de 198 pb e o alelo mutante 2 fragmentos: 175 e 23pb.
